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电泳加工的另一种--琼脂糖凝胶电泳

文章出处:人气: 发表时间:2015-06-06 12:00:41
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用.
 一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。这是我做病毒检测实验试剂盒的说明书部分,看是否对你有帮助:
配制1%的胶进行电泳
1 称取0.4g琼脂糖放于锥形瓶中,再量取40ml的0.5×TBE溶液混合,放于微波炉中煮沸,至溶液清彻透明为止,大约需1分40秒。
2 冷却到60℃时(放于掌心,能感觉到汤但又能忍受。)加2μl核酸染料,摇匀。
3 组装好制胶器,并调至水平。将胶倒于制胶器中,插好梳子。待40分钟胶冷却凝固后,就可放于倒好电泳缓冲液的电泳槽中进行点样。
4 取5-10μl样品溶液,加1-2μl 6×loading Dye,混合均匀后进行点样。每排点样孔要点一个5μl的Marker。
5 点完后,调电泳仪各参数进行电泳:U:80V;A;200A;T:40min。
做实验需要注意的一点就是要戴手套操作,保护好自己。像如果用的核酸染料是EB、缓冲液是TAE的话,就要更加小心了,那玩意儿致癌性比较强;像我们用的是GoldViewTM 核酸染料和TAE还不是特别要紧还有就是,这里说的40ml制的一般都是25孔的中胶,你要根据所需要的孔数来按比例调节用量。胶不能制的太厚或者太薄,二者都不利于电泳的。
煮胶的时候,一定要让胶完全溶解(拿起来对着光照看,没有亮亮的小点出现),不然跑出来的胶不好看;煮的时间也不能太长,煮久了对样品的回收这类的可能有影响的。
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